分光光度計(jì)使用一段時(shí)間后,一般都會(huì)存在一定的波長誤差。誤差較小時(shí)只需調(diào)整波長刻度盤或波長計(jì)數(shù)器,就能使誤差減小到合格范圍內(nèi);當(dāng)波長誤差較大時(shí),則不能再簡(jiǎn)單地運(yùn)用上述方法進(jìn)行調(diào)整。對(duì)于不同類型的分光光度計(jì),由于單色器色散特性的不同,誤差校準(zhǔn)方法也有較大的區(qū)別。
在棱鏡型儀器波長的長波區(qū)和短波區(qū),棱鏡變化同樣位置時(shí),儀器長波區(qū)的波長變化值將大于短波區(qū)的波長變化值,即在調(diào)整儀器的波長校準(zhǔn)螺絲時(shí),引起儀器波長變化的情況是非線性的。例如當(dāng)調(diào)波長校準(zhǔn)螺絲使儀器650nm處變化(7——8)nm時(shí),此時(shí)儀器400nm處只會(huì)變化1nm左右。利用這一特性,當(dāng)儀器出現(xiàn)較大的非線性誤差時(shí),就能將儀器波長誤差準(zhǔn)確而迅速地調(diào)整到合格范圍內(nèi)。
光柵的色散特性是線性的,光柵型儀器的波長誤差一般也是線性的,波長誤差的調(diào)整方法較為簡(jiǎn)單,這里不作介紹。下面詳細(xì)介紹棱鏡型儀器波長誤差的調(diào)整方法。
方法1:短波區(qū)是負(fù)誤差,長波區(qū)是正誤差時(shí)的調(diào)整
例如:某721型儀器短波區(qū)用標(biāo)準(zhǔn)值為430.0nm的標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片檢定,Δλ1=-6nm。長波區(qū)用標(biāo)準(zhǔn)值為683.0nm的標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片檢定,Δλ2=10nm。打開儀器的上部蓋板,松開波長盤上的3個(gè)固定螺絲,將刻度盤向高波長方向移|Δλ1|-1=|-6|-1=5nm(注意:此時(shí)波長盤不能動(dòng),只是移動(dòng)波長刻度盤位置)。即原波長指示為440.0nm,移動(dòng)波長刻度盤后指示為445.0nm。然后緊固刻度盤上的3個(gè)螺絲,將儀器調(diào)到長波區(qū)標(biāo)準(zhǔn)濾光片的標(biāo)準(zhǔn)值683.0nm處。將683.0nm干涉濾光片放入光路,反時(shí)針調(diào)儀器左邊的波長校準(zhǔn)螺絲,使儀器透射比為zui大。再將430.0nm干涉濾光片放入光路,檢查儀器短波區(qū)波長誤差情況,若還是負(fù)誤差,再用上述方法繼續(xù)調(diào)整;若是正誤差,按下述方法2繼續(xù)調(diào)整。
方法2:短波區(qū)是正誤差,長波區(qū)是負(fù)誤差時(shí)的調(diào)整
例如:某721型儀器用上述干涉濾光片檢定后,Δλ1=7.0nm,Δλ2=-8.0nm。此時(shí)將儀器波長刻度盤向低波長方向移Δλ1-1=7-1=6nm,并緊固刻度盤。再將儀器波長調(diào)到683.0nm處,將683.0干涉濾光片放入光路,順時(shí)調(diào)儀器波長校準(zhǔn)螺絲,使儀器透射比為zui大,其他同方法1。
用方法1或方法2將儀器高低端波長誤差減小到±1nm后,(500——600)nm之間的波長誤差將不會(huì)很大。該方法適用于各種棱鏡型紫外分光光度計(jì)和可見分光光度計(jì)。讀者可根據(jù)平時(shí)的調(diào)修經(jīng)驗(yàn)參考使用。